小鼠顳下頜關節軟骨細胞

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更新時間：2025-04-09

小鼠顳下頜關節軟骨細胞

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細胞簡介：

小鼠顳下頜關節軟骨分離自顳下頜關節軟骨組織，顳下頜關節又稱顳頜關節"或下頜關節"。由下頜頭與顳骨下頜窩和關節結節組成，左右合成一聯合關節，主理張口閉口和咀嚼運動。關節囊松弛，側方為內、外側韌帶所加強。囊內的關節盤呈卵圓形，由纖維軟骨組成，區分為前、中、后三部分。上面呈鞍狀，前凹后凸，與關節結節和下頜窩的凸凹輪廓相對應；下面凹正對下頜頭，周緣與關節囊相接，前緣與穿過關節囊的翼外肌腱相連。關節盤將關節腔分成上、下兩半。關節外更有蝶下頜韌帶(蝶棘至下頜小舌)和莖突下頜韌帶(莖突至下頜角)予以加固。關節軟骨屬于透明軟骨，表面光滑、呈淡藍色、有光澤，它是由一種特殊的叫做致密結締組織的膠原纖維構成的基本框架，這種框架呈半環形，類似拱形球門，其底端緊緊附著在下面的骨質上，上端朝向關節面，這種結構使關節軟骨緊緊與骨結合起來而不會掉下來，同時當受到壓力時候，還可以有少許的變形，起到緩沖壓力的作用。在這些纖維之間，散在分布著軟骨細胞，軟骨細胞由淺層向深層逐漸由扁平樣至橢圓或圓形的細胞組成，這些軟骨細胞維持關節軟骨的正常代謝。關節軟骨沒有神經支配，也沒有血管，其營養成分必須從關節液中取得，而其代謝廢物也必須排至關節液中，關節軟骨的這種營養代謝必須通過關節運動，使關節軟骨不斷的受到壓力刺激才行，所以關節運動對于維持關節軟骨的正常結構起重要的作用。關節軟骨細胞位于關節軟骨陷窩內。幼稚的關節軟骨細胞位于關節軟骨組織的表層，單個分布、體積較小、呈橢圓形，長軸與關節軟骨表面平行，越向深層的關節軟骨細胞體積之間增大呈圓形，細胞核圓形或卵圓形、染色淺，細胞質弱嗜堿性，常見數量不一的脂滴。成熟的關節軟骨細胞多2-8個成群分布于關節軟骨陷窩內，這些關節軟骨細胞由同一個母細胞分裂增殖而成，稱為同源細胞群。電鏡下，關節軟骨細胞有突起和皺褶，細胞質內有大量的粗面內質網和發達的高爾基復合體及少量的線粒體。在組織切片中，關節軟骨細胞收縮為不規則形，在軟骨囊和細胞之間出現較大的腔隙。體外培養的關節軟骨細胞對于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。

方法簡介：

實驗室分離的小鼠顳下頜關節軟骨采用膠原酶聯合消化制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測：

實驗室分離的小鼠顳下頜關節軟骨經Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養信息：

培養基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每3-4天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態：梭形、多角形

傳代特性：可傳2-3代左右

消化液：0.25%

培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

小鼠顳下頜關節軟骨體外培養周期有限；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養，以此保證該細胞的佳培養狀態。

細胞傳代及凍存：

原代細胞的培養方法一般有以下4種：

　　① 組織塊培養法

　　組織塊培養是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養瓶(或皿)中，瓶壁可預先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。

　?、?消化培養法

　?、?懸浮細胞培養法

　　對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養，或經淋巴細胞分層液分離后接種培養。

　　④器官培養

　　器官培養是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環境條件下培養，器官培養可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間的聯系、排列情況和相互影響，以及局部環境的生物調節作用。

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原代細胞的培養條件：

　　一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養)培養

　　1、細胞要通過充分漂洗，以盡量除去消化液的毒性；

　　2、細胞接種時濃度要稍大一些，至少為5×108細胞/L；

　　3、培養基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養；

　　4、 胎牛血清濃度為10%-80%

　　5、應在37℃5% CO2的培養箱中培養；

　　6、在起始的2天中盡量減少振蕩，以防止剛貼壁的細胞發生脫落，漂?。?/p>

　　7、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網狀，應將原代細胞換液；

　　8、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經靜置培養1周時，應將細胞懸液經低速離心后換液。

　　二、懸浮細胞培養

　　1、原代培養時要盡量去除紅細胞；

　　2、短期培養，可在含10%小牛血清的RPMI1640培養基中進行；

　　3、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內，進行分瓶試驗；

　　4、長期培養時，淋巴細胞中要加入生長因子，白血病細胞中要加入少量的原患者血清，以利細胞生長；

　　5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次；

　　6、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行